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    生化分离介质

    亲和层析
    发布时间:2020-04-27


    1. 亲和层析的基本原理:

           在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并结合,如抗原和抗体的识别结合、酶与底物(包括酶的竞争性抑制剂和辅助因子)的识别结合、激素与受体的识别结合,核酸中的互补链、多糖与蛋白复合体等等,这种结合既是专一的,又是可逆的。生物分子间的这种结合能力就称为亲和力。

           将具有特殊结构的亲和介质制成固相吸附剂放置在层析柱中,当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时,与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附,直接流出,从而与被分离的蛋白质分开,然后选用适当的洗脱液,改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来,这种分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。

           亲和层析具有高选择性、高活性回收率、高纯度,且纯化过程简单、迅速,分离效率高等特点,对分离含量极少又不稳定的活性物质尤为有效,成为生化工程中分离提纯生物活性物质的重要方法。但亲和层析必须针对某一分离对象,制备专一的层析介质和寻求层析的稳定条件,因此亲和层析的应用范围受到了一定的限制。

    2. 载体的基本要求和选择:

           理想的载体应具有下列基本条件:(1)不溶于水,但高度亲水;(2)惰性物质,非特异性吸附少;(3)具有相当量的化学基团可供活化;(4)理化性质稳定;(5)机械性能好,具有一定的颗粒形式以保持一定的流速;(6)通透性好,最好为多孔的网状结构,使大分子能自由通过;(7)能抵抗微生物和醇的作用。

    3. 影响层析分离的主要因素:

           影响亲和层析分离的主要因素有:(1)离子强度,主要影响静电作用和疏水性相互作用;(2)pH值,通过改变配基和蛋白质上带电基团的离子化程度对亲和结合产生影响;(3)抑制氢键形成的物质,如脲和盐酸胍,主要削弱亲和结合作用力中的氢键;(4)温度的改变会使分子和原子的运动剧烈程度发生改变,从而对亲和作用产生影响;(5)在亲和体系中加入一些离子或螯合剂,也将影响亲和作用力。



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